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紫外可见分光光度计的应用

发布日期:2023-05-24     作者:紫外可见分光光度计的应用     浏览:1597次

  UV-Vis已发现其适用于许多用途和情况,包括但不限于:

  1、DNA和RNA分析

  快速验证RNA和DNA的纯度和浓度是一种特别广泛的应用。下表1中给出了分析中使用的波长及其指示的摘要。在制备DNA或RNA样品时,例如用于测序等下游应用时,通常重要的是要验证其中一个样品没有被其他,或从分离过程中携带的蛋白质或化学物质。

  260nm/280nm吸光度(260/280)比值可用于揭示核酸样品中可能存在的污染,如下表2所示。纯DNA的260/280比值通常为1.8,而纯RNA的比值通常为2.0.纯DNA的260/280比值低于RNA,因为在RNA中被尿嘧啶取代的胸腺嘧啶的260/280比值低于尿嘧啶。由于280nm处的吸光度较高,被蛋白质污染的样品会降低260/280比值。

  260nm/230nm吸光度(260/230)比率也可用于检查DNA和RNA样品的纯度,并可揭示蛋白质或化学污染。蛋白质可以吸收230nm的光,从而降低260/230比率并指示DNA和RNA样品中的蛋白质污染。硫氰酸胍和异硫氰酸胍是纯化核酸中常用的两种化合物,在230nm处有强烈吸收,这也会降低260/230的吸光度比值。

  2、药物分析

  UV-Vis光谱最常见的用途之一是在制药行业。使用数学导数处理UV-Vis光谱允许解析原始光谱中的重叠吸收峰以识别单个药物化合物。例如,苯佐卡因(一种局部麻醉剂)和金霉素(一种抗生素)可以通过将第一个数学导数应用于吸光度光谱,同时在商业兽用粉末制剂中进行鉴定。通过为每种化合物构建校准函数,可以在微克/毫升的浓度范围内同时定量这两种物质。

  3、细菌培养

  紫外可见分光光度计常用于细菌培养。OD测量通常使用600nm的波长快速进行,以估计细胞浓度并跟踪生长。600nm是常用和优选的,因为它们在其中生长的细菌培养基的光学特性以及避免在需要继续实验的情况下损坏细胞。

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